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      Cell Lysis Buffer (10X)

      • 品牌:

      • 型號:

      • 規格:

      1. 如果需繼續使用緩沖液,則建議將 10x 緩沖液保存在 4°C 下 1-2 周。如要保存更長時間,則緩沖液應保存在 -20°C 下。如果要進行數次實驗,則建議分裝 10x 緩沖液。

      2. 在 24-30°C 下解凍 10x 緩沖液,上下顛倒混合。

      3. 用 ddH2O 將 10X Cell Lysis Buffer 稀釋為 1X 溶液。該產品提供的 10X 材料足以制備 150ml 總細胞提取物。

      4. 將 1X 緩沖液放在冰上冷凍,并在使用前立即添加 PMSF。

      注意:CST 建議使用前立即添加 1 mM PMSF。

      裂解:

      如需裂解黏附細胞,我們建議以下步驟:(所有試劑和裂解物必須冷藏)。

      1. 按需處理細胞。

      2. 平板用 PBS 洗滌,以去除殘留的培養基。

      3. 每個 10 cm 培養皿添加 400 μL 1x 裂解緩沖液。

      4. 平板放在冰上孵育 5 分鐘。

      5. 刮取細胞。

      6. 超聲短暫處理。

      7. 提取物用冷卻的微量離心機以 14,000 x g 的離心力旋轉分離 10 分鐘。

      8. 取上清液后使用。

      其他注意事項:

      1. 對于非黏附細胞,用 1X PBS 洗滌并進行沉淀后,每 107 個細胞添加 400 μl 緩沖液。

      2. 2X #9803 Cell Lysis Buffer 用于裂解組織樣品,但是在添加裂解緩沖液后建議進入均一化步驟。提取組織,比例為

      100 mg 組織:1 ml 緩沖液。組織提取物還需進行超聲處理。

      3. 其他蛋白酶抑制劑可添加到 1x 裂解緩沖液中。

       

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